中华人民共和国农业行业标准--硅酸盐细菌肥料

中华人民共和国农业行业标准　                              硅酸盐细菌肥料
Silicate bacteria fertilizer 　　
2000-12-22发布 2001-04-01实施
中华人民共和国农业部发布

前言
　本标准在原有标准NY227-1994《微生物肥料》的基础上，对其中的硅酸盐细菌肥料部分进行修改。
主要修改内容如下：
—增加术语、抽样和判定规则部分；在检验方法中增加允许差；
—在技术要求中删除成品无害化指标。
本标准自实施之日起，同时代替NY227-1994中的硅酸盐细菌肥料部分。
本标准的附录A、附录B、附录C都是标准的附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准起草单位：农业部微生物肥料质量监督检验测试中心、中国农业科学院土壤肥料研究所。
本标准主要起草人：李慧荃、吴观以、李元芳、葛诚、沈德龙。

硅酸盐细菌肥料
Silicate bacteria fertilizer
1 范围

本标准规定了硅酸盐细菌肥料的分类、技术要求、检验方法、检验规则、包装、标识、运输与贮存。

本标准适用于能释放钾、磷与灰分元素，改善作物营养条件的有益微生物发酵制成的活体微生物肥料制品。

2 引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

GB/T 1250一1989 极限数值的表示方法和判定方法

GB/T 6543一1986 瓦愣纸箱

NY 411一2000 固氮菌肥料

NY 227一1994 微生物肥料

3 定义
本标准采用下列定义：

3.1 硅酸盐细菌肥料在土壤中通过其生命活动，增加植物营养元素的供应量，刺激作物生长，抑制有害微生物活动，有一定的增产效果。

4 产品分类按剂型不同分为：液体菌剂、固体菌剂和颗粒菌剂。

5 技术要求
     5.1 菌种非致病菌，能在含钾的长石粉、云母及其他矿石的无氮培养基上生长，菌体内和发酵液中存在钾及刺激植物生长的激素物质。
     5.1.1 菌种用胶冻样芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）的一个变种菌株或环状芽孢杆菌（B. circulans）及其他经过鉴定用于硅酸盐细菌肥料生产的菌种，严格控制各种遗传工程微生物菌种（GEM）的使用。凡用本标准以外的菌种必须经过鉴定。
     5.1.2 菌体大小为4~7μm×1~1.2μm，长杆状，两端钝圆，胞内常有1~2个大脂肪颗粒，革兰氏染色呈阴性，有荚膜，有椭圆形芽孢。
     5.1.3 在无氮培养基上生长的菌落粘稠，富有弹性，呈圆形，边缘整齐、光滑、有光泽，隆起度大，无色透明。
     5.1.4 在牛肉膏蛋白胨培养基上基本不生长。

5.2 成品技术指标(见表1)
表1 成品技术指标            项目液体固体颗粒
外观无异臭味黑褐色或褐色粉状，湿润、松散，无异臭味黑色或褐色颗粒
水分，% - 25.0~50.0 ≤10.0
pH值 6.5~8.5 6.5~8.5 6.5~8.5
细度, % - 过孔径0.18mm标准筛的筛余物≤20 孔径5.0mm~2.5mm ≤10
有效活菌数，个/ml (个/g、个/瓶 )  ≥ 5.0×108 1.2×108 1.0×108
杂菌率1），%     ≤ 5.0 15.0 15.0
有效期2），月    ≥ 3 6 6

1）其中包括10-6马丁培养基平板上无霉菌。 2）此项仅在监督部门或仲裁检验双方认为有必要时才检测。

6 抽样
   按每一发酵罐菌液制成的产品为一批，逐批抽样检验。抽样过程要严格避免杂菌污染。
    6.1 抽样工具及用品抽样前预先准备好无菌塑料袋(或塑料瓶)、金属勺、剪刀、封口机(或封口胶带)、牛皮纸封样袋、标签、抽样封条和胶水。
     6.2 抽样数量及抽样方法在成品库抽样，按“ ”形分层设点抽样，抽样以件为单位，小包装产品以一包装箱为一件。大包装（30-50kg）产品以一袋（或一桶）为一件。抽样基数由样品基数的大小确定。1-10件，全部抽样。11-200件，抽样10件；201-400件，抽取20件。样品基数大于400件，按照超过部分的2%增加抽样件数。总件数不超过40件。
    每件小包装产品抽取一小袋，在无菌条件下每袋取样200g。将所有样品混匀，按四分法缩到2000g，分装4袋，然后封口。每2袋为一份装入牛皮纸封样袋。
    液体产品每件吸取10mL，一同防入无菌的三角瓶中，混匀后分成两份，每份250mL。冻干产品，每件取一支防入无菌的三角瓶中，加无菌液体培养液，溶解混匀后分成两份，每份50mL。贴上抽样标签和封条（一份被抽样单位留存，一份交检测中心检测）。

  7 检验方法
    7.1 仪器设备及试剂
7.1.1 仪器设备生物显微镜（10×100）；
菌落计数器；
恒温培养箱；
恒温干燥箱；
恒温摇床；
灭菌锅；
无菌室或超净工作台；
酸度计；
试管：ф15mm×150mm，ф18mm×180mm；
培养皿：直径9cm；
三角瓶：500mL；
无菌吸管：1、2、5、10mL；
玻璃刮刀；
滤纸；
酒精灯；
标准筛：孔径0.18mm和0.15mm；
1号羊毛画笔；
无菌水；
无离子水。

7.1.2 试剂(见附录A)

7.2 成品检验

    7.2.1 气味检验
    取硅酸盐细菌肥料样品打开包装，进行感官检验。
     7.2.2 外观检验
    将固体硅酸盐细菌肥料包装打开，装在白色搪瓷盘中，将液体硅酸盐细菌肥料摇匀，在明亮光线下进行感官检验。
      7.2.3 pH值测定
     液体型样品：用50mL量筒取40mL样品放入50mL烧杯中，直接在酸度计上测定，取三次测定结果的平均数。
     粉末型、颗粒型样品：称取样品15.0g，放入50mL烧杯中，加入无离子水30mL。通过磁力搅拌使溶液均匀后用酸度计测定pH值。取三次测定结果的平均数。
     7.2.4 含水量测定
    称取固体硅酸盐细菌肥料三份，每份20.00g，精确到0.01g，放入已称恒重的铝盒中。置105℃干燥箱内烘烤4h，移至干燥器内，冷却后称重。
    根据烘干前后质量差按式(l)计算含水量。取三个样品测定数的平均值。平行样品绝对偏差应低于1%。
     含水量(%)=（m0-m1）/m0×100 ………………(1)
式中：m0一烘干前样品质量，g
       m1一烘干后样品质量，g。

    7.2.5 细度测定
    准确称取粉末型样品50.0g，放入300mL烧杯中，加250mL的自来水浸泡5min，将浸泡好的样品倒入0.18mm的筛上，用自来水冲洗（冲洗时严防样品溅出），在冲洗过程中，用刷子轻轻地刷，直至流下清水为止。将筛子连同筛上样品放到烘箱中，在105℃下烘4h，冷却后称筛上样品。
    筛上样品百分数含量按式（2）计算，样品通过0.18mm孔径筛子的百分数按式（3）计算：
    筛上样品（%）=筛余物干重/（1-样品含水百分数）/样品质量×100 ………………(2)
    注：筛上样品的百分数不得大于20%。

  样品通过0.18mm孔径筛子的百分数=1-筛上样品百分数…………(3)

    颗粒样品通过筛子测量时，不须水浸泡，将孔径5.0mm和2.5mm两筛摞在一起，大孔径在上，一次通过。筛上物须小于10%。

     7.2.6 有效活菌数及杂菌率的测定
    平板计数法，采用选择培养基（见附录B），按NY 227-1994中5.2执行。

      7.2.6.1 测定步骤准确称取样品10.0g，加入带玻璃珠的100mL的无菌水中(液体菌剂取l0mL加入90mL的无菌水中)，静置20min后在旋转式摇床上200r/min充分振荡30min，即成母液的菌悬液。
     系列稀释：用无菌吸管分别吸取5mL上述母液的菌悬液加入45mL无菌水中，混匀成1：10稀释的菌悬液，这样依次稀释，分别得到1：1×102，1：1×103，1：1×104，1：1×105等浓度（每个稀释度必须更换无菌吸管）。
      加样：用0.5mL无菌吸管分别吸取不同稀释度菌悬液0.1mL，加至直径为9cm的选择培养基表面，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀地涂于琼脂表面，或取1mL不同稀释度菌悬液加入培养皿内，与琼脂培养基混匀，每个样品取3个连续适宜稀释度，每一稀释度重复3次，同时加无菌水的空白对照。
       培养：加样后将平板用无菌纸包好，放入28℃培养38h。
      菌落计数：根据所检测样品的有关技术资料，通过染色、镜检等技术确认有效菌的菌落形态、染色反应和个体形态后，分别统计有效菌数目和杂菌数目。当空白对照平皿出现菌落数大于4时，检测结果无效，须重做。每个稀释度取5~10个菌落的菌体，涂片染色（见附录A、附录B），显微镜观察识别后，选一个适宜稀释度（菌落在30~300个之间的平板），计算出同一稀释度三个平皿上菌落平均数。
     有效活菌数按式（4）计算：
    有效活菌数（个/g）=菌落平均数×稀释倍数×母液菌悬液的体积/菌剂克数或毫升数/加样量 …………………(4)
     杂菌数是指在选择培养基上，除有效活菌外的其他种菌的菌落数与马丁培养基上霉菌数之和。

      7.2.6.2 霉菌数测定

     将10-2或10-3稀释度菌液0.1mL加到马丁培养基，操作步骤同样品有效活菌数检测操作。
     杂菌率(%)=杂菌数/（有效菌数+杂菌数）×100 …………………(5)

     7.2.7有效期检验
      在产品说明书标明的有效期到达前10d测定成品各项指标，方法同7.2.1~7.2.6。

  8 检验规则
     8.1 检验分类
        8.1.1 产品出厂检验产品交货时进行的检验。
        8.1.2 产品型式检验新产品鉴定或国家质检机构质量监督检验。
     8.2 检验项目型式检验的检验项目按5.2要求进行。出厂检验不检有效期。
     8.3 判定规则

        8.3.1 合格产品: a) 检验结果符合5.2所规定的技术指标的产品为合格产品； b) 产品有效活菌数符合指标，杂菌率不符合指标，但小于本标准规定的两倍时，而且在马丁培养基平板上霉菌数小于30×10-5，其他指标有一项不符合，也可判为合格产品； c) 产品有效活菌数及杂菌率符合指标，在水分、外观、pH值、细度等次要检测项目中，有两项不符合技术指标，也判为合格产品。

          8.3.2 不合格产品: a)  产品有效活菌数不符合技术指标或投入菌种没有完全相应的检验出，判为不合格产品； b)   产品杂菌率超过本标准规定的两倍，判为不合格品； c)   在10-6马丁培养基平板上霉菌数，判为不合格产品； d)   产品水分、pH值、细度、外观等次要检测项目中，有3项不符合技术指标，判为不合格产品。

        8.3.4 本标准中质量指标合格判断，采用GB/T 1250中修约值比较。

9 包装、标识、运输和贮存

    9.1 包装
      9.1.1 内包装液体肥料小包装用塑料瓶或玻璃瓶，大包装用塑料桶。固体肥料用不透明聚乙烯塑料袋包装。冻干菌剂用玻璃指形管真空干燥。
       9.1.2 外包装
     外包装采用纸箱，纸箱质量应符合GB/T 6543要求。箱外用尼龙打包带加固。
        9.1.3 每箱(袋)产品中附有产品合格证和使用说明书，在使用说明中标明使用方法、用量及注意事项。

     9.2 标识、运输和贮存
  硅酸盐细菌肥料的标识、运输和贮存按NY 411-2000中的9.2、9.3和9.4执行。

　  附录（略）

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