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固氮菌肥料行业标准  
(发布日期:2007-2-13 12:24:29)
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    标准类别:NY-行业标准(农业)

  关键词:固氮菌肥料

  标准号:NY411—2000

  标准名称:固氮菌肥料*

  标准分类:农业土壤化肥标准

  颁布部门:

  颁布日期:

  实施日期:

  ========================================================

  1范围

  本标准规定了固氮菌肥料产品的分类、技术要求、检验方法、检验规则、包装、标识、运输、贮存等。

  本标准适用于含有益的固氮菌、能在土壤和多种作物根际中固定空气中的氮气,供作物氮素营养,又能分泌激素刺激作物生长的活体制品。本标准也适用于以固氮菌为主的含有能促进固氮、生长的植物促生根际细菌(PGPR)的复合固氮菌肥料。

  2引用标准

  下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

  GB/T625—1989化学试剂硫酸

  GB/T629—1997化学试剂氢氧化钠

  GB/T1250—1989极限数值的表示方法和判定方法

  GB/T6543—1986瓦楞纸箱

  GB/T6682—1992分析实验室用水规格和试验方法

  3定义

  本标准采用下列定义。

  31自生固氮菌

  在土壤里能固定空气中的氮,供作物氮素营养,又能分泌激素刺激作物生长的微生物。

  32根际联合固氮菌

  既依赖根际环境生长,又在根际中固定空气中的氮气,对作物的生长发育产生积极作用的微生物。

  33固氮效能

  固氮菌每消耗1g碳水化合物(糖)从空气中摄取氮素的毫克数,固氮效能用mg氮/g糖表示。

  4产品分类

  41按剂型不同分为液体固氮菌肥料、固体固氮菌肥料和冻干固氮菌肥料。

  42按菌种及特性分为自生固氮菌肥料、根际联合固氮菌肥料、复合固氮菌肥料。

  5技术要求

  51菌种

  在含一种有机碳源的无氮培养基中能固定分子氮,并具有一定的固氮效能。菌体一般为短杆状(固氮螺菌属菌体呈螺旋状),革兰氏染色阴性。

  511自生固氮菌

  用固氮菌属(Azotobacter)、氮单胞菌属(Azomonas)的菌种,也可用茎瘤根瘤菌(Azorhizobiumcaulinodans)和固氮芽胞杆菌(Paenibacillusazotofixans)菌株。

  512根际联合固氮菌

  可用下列菌种固氮螺旋菌(Azospirillum);阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)经鉴定为非致病菌的菌株;粪产碱菌(Alcaligenesfaecalis)经鉴定为非致病菌的菌株;肺炎克氏杆菌(Klebsiellapneumoniae)经鉴定为非致病菌的菌株。

  使用本准则规定之外的菌种生产固氮菌肥料时,菌种必须经过鉴定,并符合51要求。

  生产固氮微生物肥料所使用的菌种,必要时还要进行菌种染色鉴别(见附录B)和菌种固氮效能测定(见附录C)。

  52成品技术指标(见表1)

  表1成品技术指标

  指标剂型

  液体固体冻干

  项目

  乳白或淡褐色液体,黑褐色或褐色粉状,

  外观、气味混浊,稍有沉淀,无湿润、松散,无异臭乳白色结晶,无味

  异臭味味

  水分,%—250!35030

  pH值55!7060!7560!75

  细度,过孔径018mm标准筛5200

  的筛余物,%#

  有效活菌数,个/mL(个/g、个/501081010850108

  瓶)$

  杂菌率1),%$5015020

  有效期,2),月#3612

  1)其中包括10-6马丁培养基平板上无霉菌。

  2)此项仅在监督部门或仲裁检验双方认为有必要时才检测。

  6抽样

  按每一发酵罐菌液制成的产品为一批,逐批抽样检验。抽样过程要严格避免杂菌污染。

  61抽样工具及用品

  抽样前预先准备好无菌塑料袋(或塑料瓶)、金属勺、剪刀、封口机、牛皮纸封样袋、标签、抽样封条和胶水。

  62抽样数量及抽样方法

  在成品库抽样,可按“”形分层设点抽取,抽样以件为单位,小包装产品以一包装箱为一件。大包装(30!50kg)产品以一袋(或一桶)为一件。抽样件数由样品基数的大小确定。1!10件,全部抽样;11!200件,抽样10件;201!400件,抽取20件;样品基数大于

  400件者,按超过部分的2%增加抽样件数,但总件数不要超过40件。

  每件包装产品抽取一小袋,在无菌条件下每袋取样200g。然后将所有样品混匀,按四分法缩到2000g,分装4袋,然后封口。每2袋为一份装入牛皮纸封样袋。

  液体产品每件吸取10mL,一同放入无菌的三角瓶中,混匀后分成两份,每份250mL。冻干产品,每件取一支放入无菌的三角瓶中,加无菌液体培养液,溶解混匀后分成两份,每

  份50mL。贴上标签和封条(一份被抽样单位留存,一份交检测中心检测)。

  7检验方法

  71仪器设备及试剂

  711仪器设备

  生物显微镜(10100);

  菌落计数器;

  恒温培养箱;

  恒温干燥箱,

  恒温摇床;

  灭菌锅;

  无菌室或超净工作台;

  酸度计;

  试管%15mm150mm,%18mm180mm;

  培养皿直径9cm;

  三角瓶500mL;

  无菌吸管05、1、5、10mL;

  玻璃刮刀;

  滤纸;

  酒精灯;

  标准筛孔径018mm和015mm;

  1号羊毛画笔;

  无菌水;

  无离子水。

  712试剂

  选择培养基(见附录A);

  刚果红染液(05%)。

  72成品检验

  721气味检验

  取固氮菌肥料样品打开包装,进行感观检验。

  722外观检验

  将固体固氮菌肥料包装打开,装在白色搪瓷盘中,将液体固氮菌肥料摇匀,在明亮光线下进行感观检验。

  723pH值测定

  液体固氮菌肥料的pH值测定:取供检菌液直接测定pH值,取三次测定结果的平均数。固体固氮菌肥料的pH值测定:取50mL烧杯一个,加入菌肥25g,无离子水25mL。通过磁力搅拌器使溶液均匀后用酸度计测定pH值。取三次测定结果的平均数。

  724含水量测定

  称取固体固氮菌肥三份,每份2000g,精确到001g,放入已称恒重的铝盒中。置105干燥箱内烘烤4h,移至干燥器内,冷却后称重。根据烘干前后质量差按式(1)计算含水量。取三个样品测定数的平均值。平行样品绝对偏差应低于1%。

  含水量(m

  %)=0-m1

  m100…………………………(1)

  0

  式中m0———烘干前样品质量,g;

  m1———烘干后样品质量,g。

  725吸附剂颗粒细度测定

  称样1000g

  (精确至001g),置于标准筛中(直径分别为018mm或015mm),用水冲洗,用毛笔轻刷,至粉末不再通过为止。将筛余物置105!110温度下烘干,称重。筛余物百分含量按式(2)计算:

  筛余物(%)=筛余物量(1-样品含水量百分数)

  样品质量100…………(2)

  726有效活菌数和杂菌含量测定

  采用平板计数法测定有效活菌数及杂菌率。

  7261测定步骤

  采样应不少于500g,从中称取1000g,加入带玻璃珠的100mL的无菌水中(液体菌剂取10mL,加入90mL的无菌水中),静置20min后在旋转式摇床上200r/min充分振荡

  30min,即成母液的菌悬液。

  用无菌吸管吸取5mL上述母液的菌悬液加入45mL无菌水中,混匀成110稀释的菌悬液,这样依次稀释,分别得到11102,11103,11104,11105等浓度(每个稀释度必须更换无菌吸管)。

  用05mL无菌吸管分别吸取不同稀释度菌悬液01mL,加至直径为9cm平皿的选择培养基(见附录A)表面,用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀地涂于琼脂表面,或取1mL不同稀释度菌悬液加入培养皿内,与琼脂培养基混匀,每个样品取3个连续适宜稀释度,每一稀释度重复3次,同时加无菌水的空白对照。28培养2!3d后每个稀释度取5!10个菌落的菌体,涂片染色(见附录B)。显微镜观察识别后,选一个适宜稀释度(菌落在30!300个之间的平板),计算出同一稀释度三个平皿上菌落平均数。

  杂菌数是指在选择培养基上,除有效活菌外的其他菌的菌落数与马丁培养基上霉菌数之和。马丁培养基10-4稀释度菌悬液加样,操作步骤同样品有效活菌数检测操作。

  7262允许差

  平行样品误差按式(3)计算,并应符合表2的规定。

  *=%(x--x)

  (n-1…………………………………(3)

  式中*———单一标准差;

  x———同一个稀释度任一个平板测定值;

  -x———同一个稀释度平板测定的平均值;

  n———重复次数。

  表2平板上菌落数对应的单—标准差

  平板上菌落数,个/皿30!5051!99100!300

  单一标准差,100200500

  7263测定结果的计算

  按式(4)、式(5)计算样品的有效活菌数及杂菌率

  有效活菌数(个/g)=菌落平均数稀释倍数母液菌悬液的体积(mL)

  菌剂克数或毫升数

  1

  加样量(mL)……………………………………………………………………………(4)


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